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- 广州健仑生物科技有限公司
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[联系地址]：广州市天河区车陂第十五工业园1栋4067室
[联 系 人]：林
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猪伪狂犬病毒PCR检测试剂盒
发布时间：2013/9/30 11:44:00 浏览次数：788- 基本信息
- 产品类型： 其它
质量标准：
零售价格： 0
供货价格：
详情介绍
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伪狂犬病毒PCR检测试剂盒使用说明
【公司名称】 广州健仑生物科技有限公司
【营销中心】 广州市中山大道中358号东溪大厦B座511室
【公司地址】 广州市天河区车陂第十五工业园一幢4067室
【试剂盒简介】
猪伪狂犬病毒PCR 检测试剂盒，采用聚合酶链反应（PCR ）技术检测猪血清和组织中的PRV，适用于PRV的检测、诊断和流行病学调查。
【原理】
提取DNA作为模板，在DNA 聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火和中温延伸的多次循环，使特异DNA 片段的拷贝数放大数百万倍。将扩增的DNA 片段进行电泳、染色后，在紫外灯下，肉眼可见DNA 片段的扩增带。
【试剂盒组份】
1. 裂解液
8mL
8. 阳性对照
2. 蛋白酶K
110μL
9. 0.2 mL 薄壁PCR 管
15个
3. 抽提液
8mL
10. PCR 反应液A
180μL
4. 异丙醇
7mL
11. PCR 反应液B
50μL
5. 洗涤液
12mL
12. 50 倍TAE 电泳缓冲液
20mL
6. 无菌水
500μL
13. 染色液
7. 阴性对照
300μL
10μL
注：塑料袋内试剂（阳性对照、蛋白酶K、PCR反应液A和B）-20 ℃冻存，其他室温保存。
【操作方法】
一、样品制备
1样品采集：病死或扑杀的猪，取大脑海马背侧皮层、中脑、脑桥、扁桃体、淋巴结等组织；待检活猪，用棉拭子取鼻腔分泌物，置于50%甘油生理盐水中，或用注射器取血5 mL，2～8 ℃保存。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融。）
2样品处理：
2.1 组织样品的处理：称取组织0.1g于研磨器中磨碎，再加1mL生理盐水继续磨至无块状物；然后将样品转至1.5 mL灭菌离心管中，8000 rpm离心5 min，取上清100 μL于1.5 mL 灭菌离心管中，加入500 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，混匀后37℃温育1h。
2.2 全血样品的处理：待血凝后取血清放于离心管中，8000 rpm离心5 min，取上清100 μL于1.5 mL 灭菌离心管中，加入500 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，混匀后37℃温育1h。
2.3 阳性对照的处理： 混匀后取100 μL于1.5 mL 灭菌离心管中，加入500 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，混匀后37℃温育1h。
2.4 阴性对照的处理： 混匀后取100 μL于1.5 mL 灭菌离心管中，加入500 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，混匀后37℃温育1h。
二、病毒DNA的提取
1. 取出已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入600μL抽提液（用抽提液之前不要晃动，不要吸到上层保护液），用力颠倒10次混匀，12,000 rpm 离心10min。
2. 取500μL上清置于灭菌离心管中，加入500μL异丙醇，混匀，置液氮中3min或-70℃冰箱中30min。取出样品管，室温融化，13,000 rpm 离心15min。
3. 弃上清，沿管壁缓缓加入1mL 洗涤液，轻轻旋转一周后倒掉，将离心管倒扣于吸水纸上1min，再将离心管真空抽干15min或37℃烘干。
4. 用30μL无菌水溶解沉淀，作为模板备用。
三、PCR
1. 反应体系：分别取16μL PCR反应液A（用前混匀）、2μL PCR反应液B（用前混匀）和2μL模板DNA，混匀。
2. 反应程序：在PCR仪上运行以下程序： 94 ℃ 3 min ；94 ℃ 30 s 、55℃ 30 s 、72 ℃ 30 s，35个循环；72 ℃延伸10 min。
四、电泳
1. 制胶：用50倍稀释的TAE电泳缓冲液配制1%琼脂糖凝胶。
2. 电泳：待胶凝固后，取5μL PCR扩增产物点样于琼脂糖凝胶孔中，以5V/cm的电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳。
3. 染色：取50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液30mL，加入10μL染色液，混匀后将胶浸泡30min，于紫外灯下观察结果。
【结果判断】
阳性对照出现400bp扩增带，阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果成立。被检样品出现400bp扩增带为猪伪狂犬病毒阳性，否则为阴性。
【需用但未提供的材料】
组织研磨器、眼科剪、眼科镊、一次性注射器、琼脂糖、灭菌1.5mL 离心管和吸头（10 μL、200 μL、1000 μL）。
【注意事项】
1．本试剂盒有效期为6个月，不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的组分不要混用。
2．**试剂应在规定的温度储存，使用时拿到室温下，使用后立即放回。
3．注意防止试剂盒组分受污染。使用前将塑料袋内试剂瞬离15s，使液体**沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取。
4．严格按试剂盒说明书操作可以获得好的结果。操作过程中移液、定时等**过程必须。
5．**接触病料的物品均应合理处理，以免污染实验室。
联系方式
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联 系 人： 林
联系地址： 广州市天河区车陂第十五工业园1栋4067室
电 话： 0571-85885083
