如何判断蛋白质药物与DNA是否结合
2012/7/21  阅读数：

    据www.qgyyzs.net小编了解，我们在判断蛋白质是否能够与dna相互作用的时候，往往要用两个试验来进行验证。这两个试验为凝胶阻滞试验和dnasei足迹试验。

    gel retardation assay ，即凝胶阻滞试验，又称为dna迁移率变化试验。这是一项体外研究dna与蛋白质相互作用的特殊的凝胶电泳技术。在凝胶电泳中，在电场作用下，小分子dna片段要比结合蛋白质的dna片段向阳极移动的速度快。标记短双链dna片段，与蛋白质混合，对混合物进行凝胶电泳。如果目的dna与特异性蛋白质结合，向阳极移动的速度受到阻滞，对其进行放射性自显影，找到dna结合蛋白。

    dnasei足迹试验是由于蛋白质结合到ｄｎａ片段上，保护结合部位不被ｄｎａｓｅｉ破坏，蛋白质从而在dna片段上留下足迹。在电泳凝胶上的放射性自显影图片，相应于蛋白质结合的部位没有放射性标记条带，出现空白区域。这项技术主要用于检测dna和蛋白质相互作用以及其结合的位置。将待检测的双链dna分子用p32标记末端，用限制性内切酶去掉其中一个末端，得到只有一条链的单个末端标记的双链dna分子。将标记的dna与细胞蛋白质混合，待其结合后添加少量dnasei消化dna分子，控制酶量使其平均每条链只发生一次磷酸二酯键断裂。如果蛋白质不与dna结合，那么消化后不会出现等距离放射性标记末端影像。如果有一种蛋白质结合上去会保护该段dna分子，就无法产生相应的切割条带。

 

编辑：山西:小张