分子杂交技术与基因工程
2012/7/22  阅读数：

    据www.qgyyzs.net小编了解，使已克隆基因或dna片段中的任何一个特定碱基发生取代、插入或者缺失变化的过程为基因的定点诱变（site-directed mutagenesis），为基因工程和蛋白质工程的重要手段，在生产生物药物的应用中很重要。大体上分为三类，一类是包括盒式取代诱变和混合寡核苷酸诱变两种方式的盒式诱变；一类是应用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸短片短做引物，进而促使dna复制，使寡核苷酸引物成为新合成dna子链一部分的寡核苷酸引物诱变；一类是pcrg与pcr诱变。

    应用mrna差别显示技术分离克隆目的基因。真核生物mrna3’端为poly（a）结构，因此在poly（a）序列起点前的两个碱基只有十二种可能的组合排列，设计十二种不同的3’端锚定引物用以反转录mrna，合成cdna第一链。由于在这些cdna群体中，代表某一特定类型或者发育阶段的mrna种类和含量是相当低的，因此要把只在某一种组织或者某一发育阶段的细胞中表达，而另一发育阶段或者其他细胞类型中不表达的目的基因分离出来就需要通过pcr扩增。

    使用扣除杂交法分离克隆基因。扣除杂交（substractive hybridization）是用一般细胞的mrna同特殊细胞的cdna杂交，扣除一般共有的cdna，再将剩下的特异性的cdna进行克隆，使用此方法已经成功的克隆出了控制动物胚胎发育和组织分化的基因。科学家正试图利用这项技术筛选出工程菌所需要的目的dna。

编辑：山西:小张