基因分离新方法酵母双杂交体系
2012/7/28  阅读数：

    酵母双杂交体系，interaction trp，即相互作用陷阱。酵母双杂交体系是上世纪九十年代发展起来的一种分离基因的新方法，能够用于分离能够同已知靶蛋白（target protein）相互作用的基因。

    真核生物的转录因子大多数为由两个结构上分开、功能上独立的结构域组成，如gal4的n端1-147个氨基酸为dna结合域（bd），其c端768-881个氨基酸为转录激活域（ad）。在一般情况下，bd能够与gal4效应基因启动子上游的特定dna区段（uas）相结合，ad则推动转录的起始。使用基因工程的方法，将gal4的ad和bd分别结合上，导入到同一细胞株中表达，效应基因无法被激活，但可将来自不同转录因子的ad或者bd区域连接成一个功能基因，诱导报告基因表达。

    大体的实验步骤为：选择缺失gal4编码基因的酵母寄主菌株-sfy526或者hf7c；构建带有gal1 uas-启动子-lacz（his3）的转化载体；把已知的靶蛋白值编码基因克隆到pgbt9的多克隆位点上，把所有cdna都克隆到pgad424载体上，构建cdna表达文库；从大肠杆菌中分别提取这两种重组质粒，共转化感受态的酿酒酵母菌株；将共转化的酵母菌株涂布在缺乏leu、trp和his的培养基上，筛选出表达相互作用的杂种蛋白的阳性菌落。这项技术能够帮助筛选分离能够与dna相互作用的靶蛋白药物。

 

编辑：山西:小张