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AAV在中枢神经系统研究中的注射方法（二）

山东朱氏药业集团有限公司2022/10/27 6:49:38

二．静脉注射AAV9

（一）新生小鼠的颞静脉注射

1. 调整光源位置以便照亮显微镜区域，中等强度的光照*佳。

2. 将一个新生幼鼠直接置于冰上1-3min，进行麻醉。

3. 当动物在冰上麻醉时，在注射器中注满AAV病毒。体积不应超过100μL，体积在30到100μL之间不会影响转导效率。

4. 在显微镜下观察幼鼠。用不持注射器的手的食指放在幼鼠口鼻处，中指放在耳芽处，以便拉伸幼鼠的皮肤，可见颞浅静脉。

5. 确定颞浅静脉。可通过皮肤看到位于耳芽前部，周围毛细血管下部，有一条隐约可见的静脉血管，从背部到腹部，汇入颈静脉，这就是颞浅静脉。

6. 注射器针尖斜面插入颞静脉。可以看到针尖斜面通过皮肤的以后被血填充。轻压注射器，并注意幼鼠脸侧面的静脉变白。

（二）成年小鼠的尾静脉注射

1. 确保动物进入约束装置。

2. 用酒精擦拭尾巴。

3. 把尾巴置于温水中。

4. 将注射器吸满AAV病毒悬液。

5. 将注射器插入尾静脉中。如果没有瞄准，可以靠近尾巴根部再试一次。

6. 注射病毒溶液。体积控制在100-250μL。

7. 将小鼠放回笼内。                                




                                           




图2：动物约束装置




三．AAV从周围神经到目标神经元的逆行运输

1.选取250g左右的大鼠，通过25 G 1毫升注射器注射甲苯噻嗪（10mg/kg）和***（100mg/kg）。

2.将麻醉后的大鼠置于无菌布上。在每只眼睛中滴入一滴聚丙烯酸，以防麻醉造成眼睛干燥。

3.刮去肌肉附近的毛发并用酒精清洁。用刀片在皮肤上切一个小口，并用钳保持刀口开放，以暴露肌肉。

4.使用超微量注射器吸入AAV病毒悬液，并排除空气和气泡。

5.挤压肌肉以使肌肉建立起一定的厚度，并把针尖置于肌肉上。

6.缓缓插入针尖，并在肌肉中静置1min。然后以10μl/min的速度注入10-20μl的AAV悬液。

7.注射结束后，将针在肌肉中静置2min，然后缓缓拔出。可进行多次注射。

8.缝合皮肤并做耳标。将大鼠单独放在一个干净的笼子里，直到醒来

9.先用0.1 M NaOH or 10％氯漂白剂清洗手术工具，并用蒸馏水冲洗，*后用酒精冲洗。







                     

图3：超微量注射器