本品系用各地区主要的钩端螺旋体流行菌型的菌株，经培养、杀菌后，制成单价或多价疫苗。用于预防钩端螺旋体病。
    1 基本要求
    生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
    2 制造 
    2.1 菌种
    生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
    2.1.1 名称及来源 
    主要生产用菌种如下：
    ____________________________________________________
    血清群         血清型        株名            毒力
    ____________________________________________________ 
    黄疸出血群     赖型   赖、017、江 4、70091    强  
    
    犬群           犬型         611、桂44         弱  
    
    致热群       致热型        [4]、HBS5          强  
      
    秋季群       秋季型           临4             强  
     
    澳洲群       澳洲型        沃34、115、620     弱  
    
    波摩那群    波摩那型        罗、109           弱  
    
    流感伤寒群    临海型          临6             强  
    
    七日热群     七日热型     401、广229、245     弱 
    ____________________________________________________ 
    2.1.2 生产用菌种的建立
    应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
    2.1.3 生产用菌种的检定
    生产用菌种应先通过体重120～220g的豚鼠传代，2～3天后或豚鼠濒死前抽取其心血或摘取肝组织，接种生产用培养基或其他适宜培养基，并培养4代以上方可进行各项检定。
    2.1.3.1 形态及培养特性
    将菌种接种于生产用培养基，接种量在5%以下，28～32℃培养5～10天，培养物在显微镜下放大400倍观察，钩端螺旋体菌数为每视野100条以上。培养物应透明，微带乳光，摇动时稍有云雾状浑浊，菌形整齐、运动良好、两端形成钩状。
    2.1.3.2 血清凝集试验
    用培养3～10天的活培养物，在显微镜下放大400倍观察，钩端螺旋体菌数为每视野50～100条，运动良好，且无自凝，与参考血清做定量凝集反应，其凝集效价应达血清原效价之半。终点效价以菌数减少50% （ + +）为判定标准。新菌种要求用凝集素交叉吸收试验法定型。
    2.1.3.3 毒力试验
    用体重180～220g的豚鼠6只，分成两组，每只豚鼠经皮下注射已培养5～10天、在显微镜下放大400倍观察菌数为每视野50～100条活的待检培养物2ml。其中一组于注射后48小时抽取心血，按1%量接种生产培养基或其他适宜培养基2支，培养14天，镜检呈阳性（生长钩端螺旋体），即属弱毒菌株；另一组于注射后观察10天，至少应有2只豚鼠因患钩端螺旋体病死亡，即属强毒菌株。
    对于传代保存的已知的弱毒或强毒株菌种，也分别按上述相应方法进行，符合弱毒株或强毒株规定者为合格。
    2.1.3.4 免疫力试验
    用培养5～10天的活培养物，在显微镜下放大400倍观察菌数，每视野钩端螺旋体为70～100条，将该培养物于56～58℃加温1小时或以3.0g/L苯酚杀菌，以生理氯化钠溶液做3倍稀释，取体重120～220g豚鼠3只（同时饲养3只豚鼠作为对照组），皮下免疫2次，第1次0.5ml，第2次1ml，间隔5天，末次注射后10～12天，用同株或同型异株培养5～10天、在显微镜下放大400倍观察菌数为每视野50～100条的培养物2ml进行皮下攻击。
    强毒株：攻击后观察10天，免疫组豚鼠应健存，外观及食欲正常，不耸毛，运动活泼，体重增加，解剖无黄疸。对照组豚鼠至少应有2只患钩端螺旋体病死亡，判为合格。
    弱毒株：攻击后，24小时抽取心血，取2管5%～8%兔血清培养基，每管4～5ml，各加1～2滴心血（约为1%接种量）。培养14天。免疫组2/3以上为阴性，对照组均为阳性，判为合格。
    2.1.3.5 抗原性试验
    用培养5～10天的活培养物，在显微镜下放大400倍观察菌数，每视野钩端螺旋体为70～100条，将该培养物于56～58℃加温1小时或以3.0g/L苯酚杀菌，静脉免疫体重2.0～2.5kg家兔3只，共注射3次，间隔5天，第1次1ml、第2次2ml、第3次5ml，末次注射后10～15天取家兔血清与同株培养物做凝集反应，至少有2只家兔血清效价达到1：10000以上判为合格。
    2.1.4 菌种传代及保存
    2.1.4.1 菌种传代
    为保存菌种的毒力及纯度，每传3～6代，应通过体重120～220g豚鼠传代一次，并同时做血清学特性检查和生物学特性检查，合格方可作为保存菌种。
    2.1.4.2 菌种保存
    菌种应保存于含兔血清培养基或其他适宜培养基内，于18～22℃避光定期传代保存或液氮保存。
    2.2 原液
    每种血清型使用1个菌株。
    2.2.1 生产用种子
    生产用菌种经培养5～10天生长良好后，取2ml培养液，皮下注射体重120～220g的豚鼠，2～3天后或动物瀕死前取心血（或摘取肝组织），按不高于1%的量接种于生产用培养基或其他适宜培养基，28～32℃培育7～18 天（不易生长的菌株可延至30天），经纯菌检查及血清学特性检查合格后，再于生产用培养基或其他适宜培养基连续传代至少4次，经检查为生长良好、运动活泼的纯培养物方可用于大量接种。
    液氮保存的菌种复苏后即可用于生产。
    2.2.2 生产用培养基
    采用综合培养基或半综合培养基。
    2.2.3 培养
    采用10L大瓶或大罐通气培养，经28～32℃培养4～14天，在显微镜下放大400倍观察，菌数应达300条以上。取样做纯菌检查及镜检，应无杂菌。培养物可用适宜的方法浓缩。
    2.2.4 浓度测定 
    采用显微镜计数法测定菌数。
    2.2.5 杀菌
    培养物用苯酚（含量应不高于3.0g/L）或其他适宜杀菌剂杀菌。至少放置30分钟，取样镜检杀菌情况。大罐培养亦可先合并后杀菌。原液如放置半年以上，合并前应逐瓶做无菌检查。
    2.2.6 原液检定 
    按3.1项进行。
    2.2.7 原液保存 
    应于2～8℃保存。
    2.3 半成品 
    2.3.1 配制
    2.3.1.1 杀菌后的原液按预定比例将不同菌型培养物混合成1批。
    2.3.1.2 疫苗所含菌型应按当地主要流行菌型配制，5价以下（含5价）者，每型含菌数应不低于1.5×108条/ml；6价（含6价）以上，每型含菌数应不低于1.0×108条/ml。各型比例不应超过或低于计算量的10%，疫苗的总菌数应不超过1.25×109条/ml。
    2.3.1.3 加入氯化钠，使其最终含量为8.5g/L。 
    2.3.2 半成品检定 
    按3.2项进行。
    2.4 成品 
    2.4.1 分批
    应符合“生物制品分批规程”规定。
    2.4.2 分装
    应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
    2.4.3 规格 
    每瓶5ml。
    2.4.4 包装
    应符合“生物制品包装规程”规定。
    3 检定
    3.1 原液检定
    3.1.1 苯酚测定
    应不高于3.0g/L（通则3113）。
    3.1.2 无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。如大瓶培养应逐瓶做无菌检查。
    3.2 半成品检定 
    无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。若移至大瓶存放，应按前、中、后抽样做无菌检查。
    3.3 成品检定 
    3.3.1 鉴别试验
    采用血清凝集试验，按疫苗所含菌型抗原的抗血清与本品做试管凝集试验，应产生特异性凝集。
    3.3.2 物理检查
    3.3.2.1 外观
    应为微带乳光的悬液，无异臭，无摇不散的凝块及异物。
    3.3.2.2 装量
    依法检查（通则0102），应不低于标示量。
    3.3.3 化学检定
    3.3.3.1 pH值
    应为6.4～7.4（通则0631）。
    3.3.3.2 氯化钠含量 
    应为7.5～9.50（通则3107）。
    3.3.3.3 苯酚含量 
    应不高于3.0g/L（通则3113）。
    3.3.4 效力测定
    按疫苗所含菌型价数，用生理氯化钠溶液将本品稀释成每型含菌数5×107条/ml，按2.1.3.4项进行。
    3.3.5 无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.3.6 异常毒性检查 
    依法检查（通则1141），应符合规定。
    4 保存、运输及有效期
    于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，有效期为18个月。
    5 使用说明
    应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。
    钩端螺旋体疫苗使用说明
    【药品名称】
    通用名称：钩端螺旋体疫苗 
    英文名称：Leptospira Vaccine
    汉语拼音：Gouduanluoxuanti Yimiao
    【成分和性状】 本品系用各地区主要的钩端螺旋体流行菌型的菌株，经培养杀菌后制成单价或多价疫苗。为微带乳光的液体，含苯酚防腐剂。
    有效成分：灭活的单价或多价钩端螺旋体菌体。
    辅料：应列出全部批准的辅料成分。
    【接种对象】 流行地区7～60岁的人群。
    【作用与用途】 接种本疫苗后，可使机体产生免疫应答。用于预防钩端螺旋体病。
    【规格】 每瓶5ml。
    【免疫程序和剂量】  （1）上臂外侧三角肌下缘附着处皮下注射。
    （2）共注射2针，间隔7～10天。第1针注射0.5ml，第2针注射1.0ml。
    7～13周岁用量减半。必要时7周岁以下儿童可酌量注射，但不超过成人量之1/4。
    应在流行季节前完成注射。
    【不良反应】
    常见不良反应：
    接种后可出现短暂发热，注射部位可出现疼痛、触痛和红肿，多数情况2～3天内自行消退。
    极罕见不良反应：
    过敏性皮疹：应及时就诊。
    【禁忌】  （1）已知对该疫苗的任何成分过敏者。
    （2）患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。
    （3）妊娠期和哺乳期妇女。
    （4）患脑病、未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。
    【注意事项】  （1）以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者。
    （2）如出现摇不散的凝块、异物、疫苗瓶有裂纹或标签不清者，均不得使用。
    （3）疫苗开启后应立即使用，如需放置，应置2～8℃，并于1小时内用完，剩余均应废弃。
    （4）注射免疫球蛋白者，应至少间隔1个月以上接种本品，以免影响免疫效果。
    （5）月经期妇女暂缓注射。
    （6）应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。
    （7）严禁冻结。
    【贮藏】 于2～8℃避光保存和运输。
    【包装】 按批准的执行。
    【有效期】 18个月。
    【执行标准】
    【批准文号】
    【生产企业】
    企业名称：
    生产地址：
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    电话号码：
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    网址：