本法系用破伤风毒素攻击经供试品与标准品分别免疫后的小鼠（或豚鼠），比较其存活率，计算出供试品的效价。
    标准品和供试品溶液的制备  用生理氯化钠溶液将破伤风类毒素标准品和供试品以适当比例稀释成3~5个稀释度（居中的稀释度必须在攻毒后能保护约半数动物）。
    测定法  用每一稀释度的破伤风类毒素标准品和供试品溶液分别免疫体重14~16g同性别或雌雄各半NIH小鼠至少14只（或250~350g豚鼠至少10只），每只小鼠皮下注射0.5ml（或每只豚鼠皮下注射1ml）。另外10只未注射的小鼠作为对照（或另外未注射的5只豚鼠作为对照）。攻击用破伤风毒素使用0.2%明胶磷酸盐缓冲液稀释，免疫4周后，每只免疫小鼠皮下注射50LD50破伤风毒素0.5ml（或每只免疫豚鼠皮下注射100LD50破伤风毒素1.0ml）。对照组每只小鼠皮下注射1LD50破伤风毒素0.5ml（或对照组每只豚鼠注射1LD50破伤风毒素1.0ml）。攻击后观察5天，每日记录结果。根据第5天存活率的剂量反应曲线，用平行线法计算结果。95%可信限应在效价的50%~200%，否则95%可信限的低限应大于相应品种中要求的效价规格。
    【附注】试验成立应具备的条件：
    （1）供试品的最低稀释度能保护半数以上动物；
    （2）供试品的最高稀释度能保护半数以下动物；
    （3）供试品和标准品的剂量反应曲线在平行性及直线性上的差异无显著意义；
    （4）对照组动物应部分死亡而不全部死亡。