诊断学

第五节 感染免疫检测

    一、细菌感染免疫检测:

    (一)血清抗链球菌溶血素"O"试验:链球菌溶血素O(SLO)是溶血性链球菌的代谢产物之一,具有溶血作用和抗原性。人受溶血性链球菌感染后2-3周,体内便产生抗链球菌溶血素O的抗体。本实验基于抗原抗体中和试验的原理,用具有溶血能力的还原型溶血素O检验血清中有无中和抗体产生。凡查出病人血清中次抗体效价显著升高,超过400单位,可认为患者近期被溶血性链球菌感染过,并用以辅助诊断风湿热、肾小球肾炎等病患。

    1、正常参考值:<500U。

    2、临床意义:

    (1)升  高:

    ①溶血性链球菌感染、猩红热、丹毒、链球菌性咽炎、扁桃体炎。对风湿热、急性肾小球肾炎有间接诊断价值、若多次检测结果递增、并伴有红细胞沉降率(ESR)加快可有助于诊断。

    ②少数非溶血性链球菌感染:病毒性肝炎、肾病综合征、结核病、结缔组织病、亚急性感染性心内膜炎、多发性骨髓瘤等。

    ③寒冷地区、寒冷季节。

    (2)降  低:药物性(水杨酸盐类、肾上腺皮质激素、抗生素)。

    (二)伤寒H和副伤寒O沙门菌免疫检测:

    1、肥大反应WR:肥达反应,即伤寒杆菌凝集试验,英文缩写“WR”。是检查患者是否被伤寒或副伤寒杆菌感染的一种检测。肥达氏反应是用已知伤寒菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及甲型(A)与乙型(B)副伤寒沙门氏菌的标准液与病人血清做凝集试验,用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调查的免疫凝集实验。

    (1)正常参考值:

    伤寒杆菌凝集效价H<1:160,O<1:80;

    副伤寒凝集效价A<1:80,B<1:80,C<1:80

    (2)临床意义:本试验对伤寒副伤寒有辅助诊断意义。分析结果时,应注意以下诸点:

    1)伤寒流行区的健康人血中可能有低效价凝集抗体存在,当TO的效价>:180,TH>1:160时才有诊断意义;

    2)接种过伤寒疫苗者体内TH抗体可明显升高,因此单独出现“TH”效价增高无诊断意义;

    3)无论伤寒或副伤寒甲或乙病人,血清中TO抗体效价均升高,故TO抗体效价增高时,只能拟诊为伤寒类感染,而不能区别伤寒或副伤寒;

    4)伤寒杆菌与副伤寒杆菌甲、乙、丙4种的H抗原各不相同,所产生的H抗体各异,因此,当某种H抗体增高超过参考范围时,结合TO效价升高,则可诊断为伤寒或副伤寒中的某一种感染;

    5)肥大反应必须动态观察,每周检查一次,如效价显著递升,诊断意义更大;

    6)约有10%的伤寒病人始终不出现Widal阳性反应,其中一部分是由于在发病早期已大量应用过氯酶素,有的是由于应用了免疫抑制剂(如肾上腺皮质激素),有的可能是轻型感染,个别人可能由于先天性体液免疫功能缺陷或老弱、婴儿免疫功能低下所致。

    2、伤寒和副伤寒沙门菌抗体IgM测定:

    (1)正常参考值:<1:20(ELISA)。

    (2)临床意义:IgM抗体与发病后1周即出现升高,可用于早期诊断。

    3、伤寒和副伤寒沙门菌可溶性抗原测定:

    (1)正常参考值:阴性。

    (2)临床意义:阳性表示沙门氏菌感染。

    (三)流行性脑脊髓膜炎免疫学测定:脑膜炎奈瑟菌抗原 的测定有利于流行性脑脊髓膜炎的确诊,感染一周后,抗体逐渐增高,2月后逐渐下降,接受疫苗接种者高抗体效价可持续1年以上。

    1、正常参考值:阴性。

    2、临床意义:阳性表示流行性脑脊髓膜炎感染。

    (四)布氏杆菌病凝集试验:待测血清中抗布氏杆菌抗体与胶乳试剂相遇,发生抗原-抗体反应,出现肉眼可见的凝集反应。

    1、布氏杆菌凝集试验:

    (1)正常参考值:<1:25(间接血凝法)。

    (2)临床意义:凝集效价明显升高或动态上升有助于布氏杆菌病的确诊。

    2、抗人球蛋白试验:抗人球蛋白试验,又称Coombs’试验,是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要依据。

    (1)正常参考值:正常人直接与间接试验均为阴性,Coombs’试验阴性有时并不能排除AIHA。抗体效价<1:160

    (2)临床意义:本试验阳性结果主要见于下列几种情况:

    1)自身免疫性贫血,(IgG)型引起的溶血性贫血,本试验直接反应常呈强阳性,间接反应大多阴性,但亦可阳性。

    2)药物诱发的免疫性溶血性贫血①α-甲基多巴型:直接及间接反应均阳性。②青霉素型:直接反应阳性,间接反应阴性,以上二型如以正常红细胞先与有关药物于37℃培育后再加病人血清、间接反应均为阳性。③福阿亭型:(奎宁等药物)抗体通常为IgM,偶有IgG型者,直接反应为阳性,间接反应阴性,但如用IgG抗血清做试剂则结果大部分均为阴性,但如培育时加入新鲜正常人血清(供应补体)则结果为阳性。

    3)冷凝集素综合征直接反应阳性,间接反应阴性(试验需在37℃下进行)由于本病红细胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM,如果用抗IgG或抗IgM抗血清做试验时,则结果阴性,如以抗补体的抗血清做试验则直接反应阳性。

    4)新生儿同种免疫溶血病,因Rh血型不合所致溶血病,直接及间接反应均强阳性,持续数周、换血输血后数天内可变为阴性,由于“ABO”血型不合引起的溶血病,结果常为阴性或弱阳性。

    5)红细胞血型不合引起的输血反应,ABO或Rh血型不合输血,供者的红细胞被受者的血型抗体致敏,在供者被致敏的红细胞完全破坏以前,直接反应阳性,Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾妊娠胎儿为Rh阳性者,间接反应阳性,如无上述接触,第一次输血后(Rh阳性的血),数天之内间接反应也会变为阳性。

    6)其它在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等,病人直接反应亦可阳性,阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中,急性发作后用抗补体血清做试验直接反应常为阳性。

    (五)结核分枝杆菌抗体和DNA检测:感染结核分支杆菌后,体内可产生特异性抗体。将结核分支杆菌抗原包被在固相载体上,与待测血清反应,血清中相应的抗体可结合于其上,再以胶体金(或酶)标记,显示反应,可检出血清中结核分支杆菌抗体。

    1、正常参考值:胶体金或ELISA法:TB-Ab为阴性。

    2、临床意义:结核分支杆菌抗体检测阳性,若是IgM抗体,多是提示最近的结核的感染,若是IgG抗体,多是既往的结核分支杆菌的感染, 可以见于肺结核,肠结核,和其他部位的结核,以肺结核最为多见,DNA检测特异性更强,灵敏度更高。

    (六)幽门螺杆菌抗体检测:斑点反应板上的固相胃幽门螺杆菌混合抗原与血清中的幽门螺杆菌抗体形成复合物,胶体金标记抗人IgG抗体再与复合物结合,形成肉眼可见的红色圆斑点。

    1、正常参考值:胶体金斑点法为阴性。

    2、临床意义:阳性见于胃、十二指肠幽门螺杆菌感染,如胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡等。

    二、病毒感染免疫检测

    (一)TORCH试验:TORCH为多义词:指可导致先天性宫内感染及围产期感染而引起围产儿畸形的病原体,它是一组病原微生物的英文名称缩写,其中T是弓形虫,O是其他病原微生物,如梅毒螺旋体、带状疱疹病毒、细小病毒B19、柯萨奇病毒等,R是风疹病毒,C是巨细胞病毒,H即是单纯疱疹I/II型。TORCH感染后,患者特异性抗体IgM、IgG可迅速升高,IgM出现早,可持续6-12周,而IgG出现晚,但可维持终生。因此,我们常把IgG阳性看作是既往感染,而IgM阳性则做为初次感染的诊断指标。

    1、IgG阳性IgM阴性,曾经感染过这种病毒,或接种过疫苗,并且已产生免疫力,胎宝宝感染的可能性很小。

    2、IgG阴性IgM阴性,表明孕妇为易感人群。妊娠期最好重复IgG检查,观察是否阳转。

    3、IgG阳性IgM阳性,表明孕妇可能为原发性感染或再感染。可借IgG亲和试验加以鉴别。

    4、IgG阴性IgM阳性,近期感染过,或为急性感染;也可能是其它干扰因素造成的IgM假阳性。需2周后复查,如IgG阳转,为急性感染,否则判断为假阳性。

    (二)汉坦病毒抗体IgM检测:汉坦病毒可两种:引起汉坦病毒肺综合征(HPS),另一种引起汉坦病毒肾综合征出血热(HFRS)。前者主要流行于美国,在阿根廷、巴西、巴拉圭、玻利维亚以及德国也发现了病例。中国虽未发现,但有发生的可能。出现以非心源性肺水肿和高病死率(52.4%~78.0%)为特征的急性呼吸衰竭。后者即中国常见的肾综合征出血热,对其进行的分子生物学研究再一次证明其发病机制主要是病毒的直接致病作用,肾脏是早期原发性损伤器官,病毒是肾损伤的直接因素。

    1、正常参考值:阴性(ELISA法、免疫荧光法)。

    2、临床意义:肾综合征出血热(HFRS)的病原体是汉坦病毒(HTV)。感染HTV2~4天后即可在血清中检出IgM,7~10达高峰。

    (三)流行性乙型脑炎病毒抗体IgM检测:流行性乙型脑炎病毒简称乙脑病毒。流行性乙型脑炎的病原体。呈球状,核酸为单链RNA,外层具包膜,包膜表面有血凝素。低温条件下,能自下而上较长时间,在动物、鸡胚及组织培养细胞中均能增殖。幼猪是乙脑病毒的主要传染源和中间宿主,蚊子是乙脑病毒的传播媒介。当人受带病毒的蚊子叮咬后,乙脑病毒进入人体,在血管内皮细胞、淋巴结、肝、脾等吞噬细胞内增殖,并经血液循环到达脑部而引起炎症。

    1、正常参考值:阴性(ELISA和微量简介免疫荧光法)。

    2、临床意义:流行性乙型脑炎病毒是我国夏、秋季流行的不要传染病之一,当恢复期血清抗体滴度比急性期>=4倍时,有辅助诊断意义,可用于临床回顾性诊断。

    (四)柯萨奇病毒抗体和RNA测定:柯萨奇病毒属小RNA病毒科肠道病毒属,基因组为单链RNA。根据该病毒对小白鼠的致病性不同分为A、B两组,A组含23个血清型,B组含6个血清型。

    1、正常参考值:IgM和IgG均阴性(间接血凝法、IFA法或ELISA),RNA阴性(PCR法)。

    2、临床意义:IgM阳性提示现症感染,RNA阳性的诊断意义更大。

    (五)轮状病毒抗体和RNA检测:轮状病毒属胃肠病毒科,基因由11个片段组成的双链RNA,是引起人病毒性胃肠炎最常见的病原体。人体感染轮状病毒后,体内可产生特异性IgM和IgG抗体。

    1、正常参考值:轮状病毒抗体(IgM、IgG):金标免疫斑点法或ELISA法为阴性。

    2、临床意义:婴幼儿腹泻约有50%是由轮状病毒所致,常呈IgM抗体阳性,提示现症感染。成人90%以上抗轮状病毒lgG抗体阳性,提示既往感染。

    (六)嗜异性凝集试验及吸收试验:嗜异性凝集试验:用于诊断传染性单核细胞增多症的试验。即用豚鼠肾脏吸附待测血清,清除其中抗嗜异性抗原的抗体,通过观察羊红细胞凝集程度而测定血清中嗜异性抗体滴度。主要用于传染性单核细胞增多症的辅助诊断。

    1、正常参考值:阴性或羊红细胞直接凝集试验<1:160。

    2、临床意义:传染性单核细胞增多症是由EB病毒感染所致,患者发病早期血清中出现一种lgM型抗体,能非特异性地凝集绵羊红细胞,称为“嗜异性抗体”,这种抗体在发病5天后就可呈阳性反应,3—4周内达高峰,在恢复期迅速下降。如一次检查呈阳性反应,且追踪检查凝集价上升4倍以上者有诊断价值。但本试验为非特异性反应,应结合临床才可确诊。

    (七)严重急性呼吸综合征SARS病毒抗体及RNA检测:SARS,俗称传染性非典型肺炎,也称非典型肺炎。是由SARS冠状病毒(SARS-CoV)引起的一种具有明显传染性、可累及多个脏器系统的特殊肺炎。世界卫生组织(WHO)将其命名为严重急性呼吸综合征(SARS)。临床上以发热、乏力、头痛、肌肉关节酸痛等全身症状和干咳、胸闷、呼吸困难等呼吸道症状为主要表现,部分病例可有腹泻等消化道症状;胸部X线检查可见肺部炎性浸润影、实验室检查外周血白细胞计数正常或降低、抗菌药物治疗无效是其重要特征。重症病例表现明显的呼吸困难,并可迅速发展成为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。

    1、正常参考值:抗体阴性(ELISA和IFA法),RNA阴性(RT-PCR)。

    2、临床意义:抗体阳性结果表明曾感染过SARS-CoV,由阴性到阳性的血清转化,或急性期到恢复期抗体效价增高4倍以上,表明有近期感染,PCR阳性可表示标本中有SARS-CoV的遗传物质RNA。

    三、寄生虫感染免疫检测

    (一)日本血吸虫抗体检测:日本血吸虫侵入人体后,人体对血吸虫发生特异性免疫反应,于病程中体内出现IgM、IgE和IgG抗体。这有利于临床诊断和流行病学调查。

    1、正常参考值:

    ①环卵沉淀法:血吸虫虫卵内毛蚴分泌物与患者血清中抗体反应,在虫卵周围形成特异性沉淀物为阳性;正常人为阴性。

    ②ELISA和胶乳凝集法:IgE为0~150IU/L(ELISA);IgG、IgM为阴性。

    2、临床意义:IgE、lgM阳性提示病程处于早期,是早期诊断的指标。IgG阳性提示疾病已是恢复期,曾有过血吸虫感染,可持续数年。

    (二)囊虫抗体检测:囊虫病是一种人和猪共患的寄生虫病。囊虫侵入人体后,可在血清和脑脊液中出现特异性IgG抗体,其特异性和敏感性较高。检测囊虫抗体有助于诊断。

    1、正常参考值:

    ①ELISA法:血清低于1∶64为阴性;脑脊液低于1∶8为阴性。

    ②间接血凝法:血清低于1∶128为阴性;脑脊液低于1∶8为阴性。

    2、临床意义:IgG阳性见于囊虫病。其中脑囊虫病占60%~80%。此外,可用作流行病学调查。

    (三)疟原虫抗体和抗原检测:指检测疟原虫感染后血液中的抗原和抗体。

    1、正常参考值:血清<1:64,脑脊液<1:8为阴性(ELISA)血清<1:28,脑脊液<1:8为阴性(间接血凝法)。

    2、临床意义:抗体阳性提示近期由疟原虫感染,但是疟原虫抗体检测阴性不足以否定疟疾,应做抗原检测或图片法找疟原虫。

    四、性传播疾病免疫检测:

    (一)衣原体抗体检测:沙眼衣原体抗体指细胞内寄生的沙眼衣原体感染后产生的特异性抗体。沙眼衣原体是沙眼的主要病原微生物。

    1、正常参考值:沙眼衣原体阴性。IgM效价≤1:32,IgG效价<1:512(IFA)。

    2、临床意义:沙眼衣原体感染病人血清中可检出特异性抗体。lgM出现较早,持续约1个月,其阳性提示近期感染沙眼衣原体,可作为早期诊断的指标;lgG出现较晚,持续时间较长,可用于回顾性诊断和流行病学调查。阳性,见于沙眼、成人包涵体结膜炎、男性尿道炎、女性宫颈炎和输卵管炎、性病淋巴肉芽肿等。

    (二)支原体的血清学检测:又称霉形体,为目前发现的最小的最简单的原核生物。基因数量为480。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体(支原体是原核细胞,原核细胞的细胞器只有核糖体)。

    1、正常参考值:补体结合试验效价<1:64;间接血凝试验阴性。

    2、临床意义:单份血清效价>1:64~1:128者,或双份血清有4倍以上增长者有诊断意义。间接血凝试验的敏感性高于补体结合试验,感染发病后7天出现阳性。

    (三)梅毒螺旋体抗体检测:梅毒是由苍白螺旋体感染引起的一种性传播性疾病。其病原体感染人体后出现特异性抗体。

    1、正常参考值:快速血浆反应试验阴性(RPR)。梅毒螺旋体血凝试验阴性(TPHA)

    2、临床意义:本项目用于梅毒的诊断,敏感性较高,定性试验阳性可确诊梅毒。

    (四)淋球菌血清学检测及DNA检测:血清学检测主要是通过检测血液中的抗单纯淋病病毒抗体来诊断。协同凝集试验是常用的方法,也可用gD2作抗原检测HSV-2抗体,具有敏感性高且能区分HSV-l和HSV-2的优点。

    1、正常参考值:协同凝集试验阴性;PCR定量阴性。

    2、临床意义:协同凝集试验特异性强、敏感性高且操作简便,阳性即可确诊;PCR也可确诊。

    (五)人类免疫缺陷病毒抗体及RNA检测:人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的检测指标主要有抗-HIV、P24抗原和HIV RNA,特异抗体和抗原的检测方法主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)、明胶颗粒凝集试验(PA)、免疫渗滤层析(胶体金或硒试纸条)、免疫荧光试验、化学发光免疫测定和蛋白印迹(WB)等。ELISA、PA、免疫渗滤层析和化学发光免疫测定均属于初筛试验。WB为HIV抗体的确认试验。HIV RNA的检测方法主要有实时荧光逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)、基于核酸序列的扩增试验(NASBA)、分枝DNA(bDNA)等。HIV RNA检测亦可作为抗-HIV、P24抗原免疫测定呈阳性反应时确认试验。

    1、正常参考值:ELISA法和快速蛋白印迹法为阴性;蛋白印迹试验和RT-PCR法RNA均为阴性。

    2、临床意义:筛选试验灵敏度高,但特异性不高,故有假阳性;所以初筛阳性者应予以蛋白印迹试验或RT-PCR法检测HIV-RNA阳性,则HIV感染确诊无疑。

细菌感染免疫检测病毒感染免疫检测寄生虫感染免疫检测性传播疾病免疫检测

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