一、AIDS病原体检测：目前检测HIV的方法有100多种，可以分为抗体检测和病毒检测两大类。
（一）病毒检测：包括细胞培养(病毒分离)、p24抗原检测和病毒核酸检测。早期对HIV的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体,间接地诊断HIV感染。随着生物科技的发展，近年来分子生物学方法不断被应用到HIV的检测中，尤其核酸检测已经成为了HIV实验室诊断的发展方向，它可直接检查HIVRNA,可在发现血清学变化之前检测HIV感染,而且比P24抗原检测方法更灵敏。
（二）抗体检测：HIV抗体一般在人感染后几周逐渐出现,可延续至终生，血清学试验分为初筛和确认试验。最常用的初筛试验和确认试验分别是酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验(WB)。常规实验方法：酶联免疫吸附试验、免疫印迹试验、间接免疫荧光法(IFA)。快速检测方法：明胶颗粒凝集试验、斑点免疫结合试验、P24抗原的检测、分子生物学方法、RT?PCR检测法、荧光实时PCR检测技术、支链DNA(bDNA)、连接酶酶促链式反应(LCR)、核酸序列依赖性扩增(NASBA)、转录介导的扩增(TMA)。
二、梅毒病原体检测：
1、暗视野显微镜检：暗视野显微镜检查是一种检查梅毒螺旋体的方法。暗视野，顾名思义即是显微镜下没有明亮的光线，它便于检查苍白的螺旋体。这是一种病原体检查，对早期梅毒的诊断有十分重要的意义。
早期皮肤粘膜损害（一期、二期霉疮）可查到苍白螺旋体。一期梅毒苍白螺旋体多在硬下疳的硬结、溃疡的分泌物和渗出液中存在，肿大的淋巴结穿刺也可检出。二期梅毒苍白螺旋体可在全身血液和组织中检出，但以皮肤检出率最高。早期先天性梅毒，可以通过皮肤或粘膜损害处刮片发现梅毒苍白螺旋体。最近，通过羊膜穿刺术获得孕妇的羊水，以其作暗视野显微镜观察，对先天性梅毒有诊断价值。
2、梅毒血清学检测：梅毒血清学检查对于诊断二期、三期梅毒，以及判定梅毒的发展和痊愈，判断药物的疗效都有十分重要的意义。梅毒血清学检查包括非梅毒螺旋体血清学试验和梅毒螺旋体血清学试验。前者常用于临床筛选及判定治疗的效果，抽血后1小时即可出结果，费用也低廉。后者主要是用于判定试验，但是它不能判定治疗效果，一旦患有梅毒，这一试验将终身阳性。
（1）非梅毒螺旋体血清试验： 这类试验的抗原分为心磷脂、卵磷脂和胆固醇的混悬液，用来检测抗心磷脂抗体。由于这些试验具有相同的标准化抗原，所以敏感性相似。常用的有三种：①性病研究实验室玻片试验（VDRL）；②血清不加热的反应素玻片试验（USR）；③快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）。可用作临床筛选，并可作定量，用于疗效观察。
（2）梅毒螺旋体血清试验： 包括有：①荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）；②梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）；③梅毒螺旋体制动试验（TPI）等。这类试验特异性高，主要用于诊断试验。
（3）梅毒螺旋体IgM抗体检测：梅毒螺旋体IgM抗体检测是近年来才有的新的诊断梅毒的方法。IgM抗体是一种免疫球蛋白，用它来诊断梅毒具有敏感性高，能早期诊断，能判定胎儿是否感染梅毒螺旋体等优点。特异性IgM类抗体的产生是感染梅毒和其他细菌或病毒后机体首先出现的体液免疫应答，一般在感染的早期呈阳性，随着疾病发展而增加，IgG抗体随后才慢慢上升。经有效治疗后IgM抗体消失，IgG抗体则持续存在，TP-IgM阳性的一期梅毒病人经过青霉素治疗后，约2～4周TP-IgM消失。二期梅毒TP-IgM阳性病人经过青霉素治疗后，2～8个月之内IgM消失。此外，TP-IgM的检测对诊断新生儿的先天性梅毒意义很大，因为IgM抗体分子较大，其母体IgM抗体不能通过胎盘，如果TP-IgM阳性则表示婴儿已被感染。
3、基因检测技术：特异性强，敏感性高，适用于梅毒孕妇羊水、新生儿血清和脑脊液标本检查，所谓PCR即多聚酶链式反应，即从选择的材料扩增选择的螺旋体DNA序列，从而使经选择的螺旋体DNA拷贝数量增加，能够便于用特异性探针来进行检测，以提高诊断率。但是，这种实验方法，要求有条件绝对好的实验室和技术一流的技师。其实诊断梅毒不一定要作PCR，作一般的抽血化验即可。
4、脑脊液检查：晚期梅毒患者，当出现神经症状，经过驱梅治疗无效，应作脑脊液检查。这一检查对神经梅毒的诊断、治疗及预后的判断均有帮助。检查项目应包括：细胞计数、总蛋白测定、VDRL试验及胶体金试验。
三、淋病病原体检测：
(一)涂片检查：取患者尿道分泌物或宫颈分泌物，作革兰氏染色，在多形核白细胞内找到革兰氏阴性双球菌。涂片对有大量脓性分泌物的单纯淋菌性前尿道炎患者，此法阳性率在90%左右，可以初步诊断。女性宫颈分泌物中杂菌多，敏感性和特异性较差，阳性率仅为50-60%，且有假阳性，因此世界卫生组织推荐用培养法检查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌较少，阳性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高检出率。咽部涂片发现革兰氏阴性双球菌不能诊断淋病，因为其他奈瑟菌属在咽部是正常的菌群。另外对症状不典型的涂片阳性应作进一步检查。
(二)培养检查：淋球菌培养是诊断的重要佐证，培养法对症状很轻或无症状的男性、女性病人都是较敏感的方法，只要培养阳性就可确诊，在基因诊断问世以前，培养是世界卫生组织推荐的筛选淋病的唯一方法。目前国外推荐选择培养基有改良的thayer-martin(TM)培养基和new york city(NYC)培养基。国内采用巧克力琼脂或血琼脂培养基，均含有抗生素，可选择地抑制许多其他细菌生长。在36℃，70%湿度，含5%-10%co2(烛缸)环境中培养，24-48小时观察结果。培养后还需进行菌落形态，革兰氏染色，氧化酶试验和糖发酵试验等鉴定。培养阳性率男性80%-95%，女性80-90%。
(三)抗原检测：
1、固相酶免疫试验，用来检测临床标本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地区而又不能作培养或标本需长时间远送时使用，可以在妇女人群中用来诊断淋球菌感染。
2、直接免疫荧光试验：通过检测淋球菌外膜蛋白i的单克隆抗体作直接免疫荧光试验。但目前在男女二性标本的敏感不高，特异性差，加之实验人员的判断水平，故该实验尚不能推荐用来诊断淋球菌感染。
(四)基因诊断：
1、淋球菌的基因探针诊断，淋球菌的基因探针诊断，所用的探针有：质粒dna探针，染色体基因探针和rrna基因探针。
2、淋球菌的基因扩增检测，上面讲述的探针技术检测淋球菌的方法，虽然比培养方法在灵敏度，特异性和方便性上有了很大的提高，但其仍有一定的局限性，如多数情况下需要标本的淋球菌浓度很高，pcr技术和连接酶链反应的出现进一步提高了检测淋球菌的灵敏性，它具有快速、灵敏、特异、简便的优点，可以直接检测临床标本中极微量的病原体。
四、非淋菌尿道炎病原体检测：
1、直接免疫荧光法：将特异的衣原体单克隆抗体用荧光素标记后检测标本中的衣原体抗原，如标本中有衣原体，则和抗体结合，在荧光镜下可见苹果绿色的荧光，一张涂片中衣原体数在10个以上时为阳性，特异性＞97%，敏感性为70%～92%。
2、血清学酶联免疫法：用光谱测相仪检测泌尿生殖道中的衣原体抗原，发现颜色改变为阳性，24小时获得结果，敏感性为60%～90%，特异性为92%～97%。
3、沙眼衣原体培养：沙眼衣原体为专性细胞内寄生物，只有在活细胞中才能生长繁殖，常用于衣原体培养的细胞是McCoy细胞和Hela229细胞，特异性为99%～100%，敏感性为68.4%～100%，是目前诊断沙眼衣原体的金标准。
4、解脲支原体培养：利用解脲支原体能分解精氨酸产氨，发酵葡萄糖产酸的原理，分别使含精氨酸的肉汤培养基变为碱性，指示剂颜色由黄变红，葡萄糖肉汤培养基由粉红色变为黄色，该方法已广泛应用于临床。
5、分子生物学：利用聚合酶链反应（PCR）和连接酶联反应（LCR），敏感性和特异性均优于其他方法，但要注意防止污染造成的假阳性。
五、生殖器疱疹病原体检测：
（一）细胞学检查：挑取泡液或从疱底溃疡面刮取少量皮损进行涂片，通过Wright-Giemsa染色或Papanicolaou染色，寻找大的多核巨细胞和多核巨细胞核内嗜酸包涵体。但此方法不能区别HSV感染或水痘-带状疱疹病毒感染等相关疱疹病毒类疾病，只有在急性期水疱出现时才可能得出阳性结果。一般作为初筛试验。
（二）免疫细胞化学检查：通常用皮损细胞涂片，经特殊处理后在荧光显微镜下观察检测抗原，生殖器疱疹病毒感染细胞可见亮绿色荧光。
（三）病毒分离：通常用棉拭子从发病1-3天内的水疱底部取得标本，用人胚成纤维细胞、人羊膜细胞、肾细胞等进行病毒分离培养、再通过免疫荧光法鉴定、加以确认。其分离成功的前提是取材的准确和尽快接种，由于其操作复杂，费用昂贵，技术条件要求高，目前尚不能普遍使用。
（四）抗体检测法：HSV抗体检测不能作为生殖器疱疹诊断的依据。但情况下，如判断是否曾经感染过HSV；症状不典型的感染者；评估生殖器疱疹患者配偶所生新生儿的感染风险以及单纯疱疹预防接种时可能得到的成功率。这时应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中HSV-1和HSV-2 IgM/IgG抗体。
(五)基因检测法：用PCR荧光定量法检测皮损的HSV-Ⅱ-DNA。能直接检测出生殖器溃疡性疾病患者损害部位的HSV-2病原体，敏感性和特异性高，大大提高生殖器溃疡病人中HSV确诊的能力。其费用较昂贵，且操作技术、实验室条件和设备的要求也较高。
六、尖锐湿疣病原体检测：
（一）醋白试验：以3%～5%的醋酸溶液浸湿的纱布包绕或敷贴在可疑的皮肤或黏膜表面，3～5分钟后揭去，典型的尖锐湿疣损害将呈现白色丘疹或疣赘状物，而亚临床感染则表现为白色的斑片或斑点。醋白试验对辨认早期尖锐湿疣损害及亚临床感染是一个简单易行的检查方法。对发现尚未出现肉眼可见改变的亚临床感染是一个十分有用的手段。醋白试验简单易行，应作为尖锐湿疣患者的一个常规检查手段，有助于确定病变的范围，进行指导治疗。但醋白试验并不是个特异性的试验，对上皮细胞增生或外伤后初愈的上皮可出现假阳性的结果。
（二）细胞学宫颈涂片检查：主要用于检查女性阴道或宫颈上皮有否HPV的感染。在被检部位刮取细胞并涂于玻片上，以95%酒精固定;常用巴氏染色法，镜下所见分为五级。
（三）分子生物学聚合酶链反应(PCR):取病变组织或可疑部位样品，提取DNA，利用特异引物对目标DNA予以扩增。引物可以是HPV通用引物，亦可以是针对某一型的特异引物。该法敏感性高，特异性强，但该方法应该在通过相关机构认可或认证的实验室进行开展。
（四）免疫组化检查：用带有过氧化物的抗体检查HPV抗原，对病原体进行组织定位，有PAP法和ABC法。
七、软下疳病原体检测：
（一）抗体检测法：在目前，抗体检测应用最广泛的是HSV-2抗体检测，如蛋白印迹法也可用GD2作抗原检测HSV-2抗体，具有敏感性，且能区分HSV-1和HSV-2的优点。
（二）血清学检查：一般情况下，血清学检查主要用于检测抗HSV-1和抗HSV-2抗体，诊断HSV的原发性感染，进行HSV感染的血清流行病学调查。可采用免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、免疫印迹试验和放射免疫试验等法检测。
（三）电镜检查：经过临床观察，发现取水疱液或病变脑组织制片，在电镜下观察病毒颗粒，阳性率为百分之五十，但HSV与其他软下疳病毒在形态上难以区分。免疫电镜检查较为特异。
（四）细胞培养法：通常，这种检查方法从水疱底部取材做组织培养分离病毒，为目前最敏感、最特异的检查方法，需时5天-10天。因其技术条件要求高，价格昂贵，目前尚不能普遍使用。
（五）基因检测法：用PCR荧光定量法检测皮损的HSV-2-DNA。能直接检测出生殖器溃疡性疾病患者损害部位的HSV-2病原体，敏感性和特异性高，大大提高生殖器溃疡病人中HSV确诊的能力。其费用较昂贵，且操作技术、实验室条件和设备的要求也较高。
第四节 性传播疾病病原体检测